檢測認證人脈交流通訊錄
- 登革熱是由登革病毒引起的病毒性感染,人體在感染后會產(chǎn)生抗體來對抗病毒。登革病毒IgG抗體檢測試劑盒是一種用于檢測*清中登革病毒IgG抗體水平的診斷工具。
人登革病毒IgG抗體檢測試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理,將包含登革病毒抗原的試劑盒中的試紙板與被檢測血清樣本反應(yīng)。如果血清中存在登革病毒IgG抗體,則這些抗體將結(jié)合到試劑盒中的病毒抗原上。接下來,添加特定的酶標記二抗,它將結(jié)合到已經(jīng)與病毒抗原結(jié)合的IgG抗體上。最終,加入底物,酶催化反應(yīng)后會產(chǎn)生顏色變化,顏色深淺程度與樣本中IgG抗體水平成正比。根據(jù)顏色變化可以判斷被檢測樣本是否存在登革病毒IgG抗體,并且可以估算出其相對水平。
一、組成:
試劑盒組成48孔配置96孔配置保存
說明書1份1份
封板膜2片2片
密封袋1個1個
酶標包被板1×48 1×96 2-8℃保存
標準品0.3ml×6管0.3ml×6管2-8℃保存
酶標試劑5 ml×1瓶10 ml×1瓶2-8℃保存
樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
終止液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
20×濃縮洗滌液15ml×1瓶25ml×1瓶2-8℃保存
注:標準品濃度依次為:
二、樣本處理及要求:
樣本處理要求:
1.采集血清樣本,禁食8小時以上后取空腹靜脈血。
2.將血清離心10分鐘,收集上清液作為檢測樣本。
3.樣本處理前應(yīng)小心操作,避免污染和雜質(zhì)干擾。
4.如不能及時處理,建議在-20℃以下保存,但不要反復凍融。
檢測要求:
1.按照說明書中的方法進行操作,確保每一步操作都正確無誤。
2.注意正負對照組的設(shè)置。
3.建議使用雙盲法進行檢測結(jié)果的解讀。
4.結(jié)合臨床癥狀和其他檢查結(jié)果進行全面分析。
三、操作步驟
1.從冰箱中取出試劑盒,讓它在室溫下平衡10-30分鐘。
2.將標準品和患者血清標本放在室溫下,等待達到室溫。
3.打開試劑盒袋子并將試劑盒標簽與樣本標簽匹配。
4.取出微孔板并用反應(yīng)單元涂層洗滌緩沖液(Wash buffer)洗滌每個孔。吸干溶液后重復此步驟兩次。
5.加入100μL標準品或患者血清樣本到微孔板的相應(yīng)孔中。
6.在孔蓋上加封板密封膜,并在37°C下孵育60分鐘。
7.移除密封膜,倒去液體并在三杯洗滌器中用Wash buffer洗滌每個孔。吸干溶液后重復此步驟五次。
8.加入100μL HRP-IgG檢測抗體到每個孔中,在37°C下孵育30分鐘。
9.移除密封膜,倒去液體并在三杯洗滌器中用Wash buffer洗滌每個孔。吸干溶液后重復此步驟五次。
10.加入100μL TMB底物到每個孔中,在室溫下*15分鐘至30分鐘。
11.加入100μL停止溶液到每個孔中,用洗滌器清洗板子,并立即讀取OD值。
注意事項:操作過程中要注意避免試劑的污染,嚴格按照說明書上的方法進行操作,并使用符合規(guī)定的質(zhì)控標準。
四、注意事項:
1.檢測前需遵循操作規(guī)范和生物安全規(guī)定,佩戴好實驗室個人防護裝備。
2.樣本采集應(yīng)按照標準程序進行,確保樣本質(zhì)量可靠。
3.檢測前需要將試劑盒中的所有試劑和樣本達到平衡溫度。
4.嚴格按照說明書操作,不得隨意更改檢測步驟或參數(shù)。
5.檢測結(jié)果需結(jié)合臨床表現(xiàn)、病史和其他檢測指標進行綜合分析和判斷。
6.陰性結(jié)果不排除感染可能,仍需結(jié)合相關(guān)因素進行判斷。
7.此檢測只能用于研究和臨床診斷,不能作為疫苗效果評價的依據(jù)。
五、計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
六、試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15%。
七、保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月
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