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分子熒光光譜儀的應(yīng)用

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分子熒光光譜儀的應(yīng)用http://www.sjyqyb.com分子熒光光譜儀熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等很多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描?！　晒夤庾V法具有敏捷度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等長處，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。b　　基本結(jié)構(gòu)與原理/b　　由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)由濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來?！　』窘Y(jié)構(gòu)和原理如圖所示，光源與檢測器成直角方式鋪排?！　晒夥止夤舛扔嫷墓ぷ髟恚骸　∥镔|(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不不亂的,在返回基態(tài)的過程中將一部門的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光．　　不同物質(zhì)因為分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定?！　≡谌芤褐?，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用尺度曲線法進(jìn)行?！　》肿訜晒夤庾V儀熒光分光光度計基本結(jié)構(gòu)和原理圖　　1. 光源：　　為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等，故較常用。　　2．激發(fā)單色器：　　置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。　　3．發(fā)射單色器：　　置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜?！　?．樣品室：　　通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。丈量液體時，光源與檢測器成直角鋪排；丈量固體時，光源與檢測器成銳角鋪排。　　5．檢測器：　　一般用光電管或光電倍增管作檢測器?？蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D(zhuǎn)為電信號。　　功能特點　　1．熒光發(fā)射光譜　　選擇某一固定波長的光激發(fā)樣品，記實樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。　　2．熒光激發(fā)光譜　　選定某一熒光發(fā)射波長記實熒光發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜?！　?．時間分辨技術(shù)；　　可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進(jìn)行分辨并分別丈量?！　r間分辨熒光測定公式如下：　　P(t) = P0 EXP (-t /τ) 　　式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)　　P0：強(qiáng)度取值　　EXP：指數(shù)運算符　　t：時間取值　　τ：熒光均勻時間壽命　　應(yīng)用：　　對經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析，可應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化工等部分。

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唐偉

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