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篤瑪雞多配體聚糖4(SDC4) ELISA 試劑盒說明書

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品　　牌：
DM

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出廠價(jià)：
1 元/套

主要規(guī)格：
96T/48T

用　　途：
科研

雞多配體聚糖4(SDC4) ELISA 試劑盒計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。雞多配體聚糖4(SDC4) ELISA 試劑盒酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。洗滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。顯色：每孔加入底物液A 50μl，再加底物液B 50μl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間）。終止：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。雞多配體聚糖4(SDC4) ELISA 試劑盒常用標(biāo)簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。 Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標(biāo)蛋白；其純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。 His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸（His-His-His-His-His-His）組成的短肽，專門設(shè)計(jì)用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小，且較容易分離和純化，是目前使用最廣泛的一種。 GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)率高，表達(dá)產(chǎn)物純化方便，利于GST抗體制備的特點(diǎn)。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細(xì)菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。 GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測，以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測目的蛋白的表達(dá)和分別。GFP抗體不經(jīng)可以檢測GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w，也可以檢測和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達(dá)蛋白等。 Myc標(biāo)簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。因此可用于檢測重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體到活化的瓊脂糖上而進(jìn)行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會(huì)降低蛋白質(zhì)的活力，因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測但很少用于純化。 HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)HA（influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型，相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛運(yùn)用。 MBP標(biāo)簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以融合在蛋白的N端或C端?？捎肕BP抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標(biāo)簽標(biāo)記的重組蛋白。其余標(biāo)簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但應(yīng)用相對較少。

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楊燕燕

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