檢測認證人脈交流通訊錄
- 羊抗人全血清
應(yīng)用范圍:
酶標試劑、免疫比濁試劑、免疫膠乳試劑生產(chǎn)、提取純化抗體、組化實驗中
對應(yīng)抗原,或封閉對應(yīng)雜抗體,測定對應(yīng)抗原濃度,或抗原夾芯法測定對應(yīng)
抗體,吸收雜抗原成分,層析純化抗原,分析與鑒定對應(yīng)抗原成分,封閉交
叉抗原,測定對應(yīng)抗原成分,測定抗原純度等。
1.液體抗血清保存原則:避免反復(fù)凍融
2.短期保存的抗血清:如幾周內(nèi)就會使用,收到后推薦在 2-8℃保存,2-8℃短暫保存
數(shù)周對活性沒有影響。
3.長期保存的抗體:如抗體需超過 1 個月后才會使用,請酌情分裝后于-20℃保存。
羊抗人全血清
常用標簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag標簽系統(tǒng)利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白;其純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設(shè)計用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小,且較容易分離和純化,是目前使用最廣泛的一種。
GST標簽體系具有蛋白表達率高,表達產(chǎn)物純化方便,利于GST抗體制備的特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。
GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達效率的檢測,以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分別。GFP抗體不經(jīng)可以檢測GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w,也可以檢測和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達蛋白的表達、細胞內(nèi)定位,以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。
Myc標簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細胞術(shù)中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過偶聯(lián)Myc標簽抗體到活化的瓊脂糖上而進行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質(zhì)的活力,因此Myc標簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測但很少用于純化。
HA標簽系統(tǒng)利用一個HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細胞類型,相應(yīng)的HA標簽抗體也被廣泛運用。
MBP標簽蛋白大小為40kDa,由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在細菌中表達,MBP可以融合在蛋白的N端或C端??捎肕BP抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標簽標記的重組蛋白。
其余標簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但應(yīng)用相對較少。
羊抗人全血清
試劑及配制
1、緩沖生理鹽水:
( 1) 貯存液: Na2HPO4.12H2O 2.85g
KH2PO4 0.27g
NaCl 17.00g
蒸餾水定容至 100ml
4℃保存?zhèn)溆?
( 2)應(yīng)用液: 5ml 貯存液加 95ml 蒸餾水,再加 10%硫酸鎂 0.1ml, 當(dāng)日配制, 12 小時內(nèi)使用。
2、2%綿羊紅細胞:無菌采取綿羊血液,于等量 Alsever 液中可保存 3 周。用前以緩沖液洗 3次,并配成 2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數(shù)法使懸液細胞濃度標準化。
3、溶血素:將綿羊紅細胞溶血素(效價 1:4000),用應(yīng)用液做 1:2000 倍稀釋(即 1ml 溶血素加 1999ml 應(yīng)用液)。
4、待測血清:新鮮血液室溫放置 30min,再 4℃放置 60min,使血塊收縮, 4℃離心( 3000r/min)10min,取上清, -20℃保存。
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