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肉毒桿菌是一種生長在缺氧環(huán)境下的致病菌，在罐頭食品及密封腌漬食物中具有極強(qiáng)的生存能力，它在繁殖過程中所分泌的肉毒毒素具有極強(qiáng)的毒性，是KCN毒性的一萬倍。純化結(jié)晶的肉毒毒素1mg能殺死2億只小鼠，對人的致死劑量約0.1μg。它通過阻斷人體神經(jīng)接頭，導(dǎo)致全身麻痹、癱瘓，嚴(yán)重時能引起人呼吸肌麻痹，導(dǎo)致無法呼吸，最終死亡。目前報道新西蘭恒天然奶粉大批量被肉毒梭菌污染，給人們身心健康造成了極大的危害，國家加大了對食品質(zhì)量安全的排查力度，為此，科標(biāo)生物檢測中心現(xiàn)全面開展食品中肉毒梭菌檢測服務(wù)，為食品安全檢測貢獻(xiàn)一份力量。　　科標(biāo)生物檢測中心主要結(jié)合GB/T4789.12-2003食品中衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 肉毒梭菌及內(nèi)毒素檢驗(yàn)和SN/T 2525-2010食品中肉毒梭菌的PCR檢測方法對食品中肉毒桿菌進(jìn)行檢驗(yàn)。　　將樣品經(jīng)增菌后劃平板分離單菌落，挑取可疑菌落到胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉湯(TPGY)培養(yǎng)基培養(yǎng)，對培養(yǎng)物用DNA提取試劑盒抽提DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)PCR產(chǎn)物中是否含有肉毒梭菌的的特征條帶，從而對食品中是否污染肉毒梭菌進(jìn)行快速檢測。試驗(yàn)方法 1、樣品的增菌培養(yǎng) 　　取庖肉培養(yǎng)基2管和TPGY培養(yǎng)基2管，煮沸10min~15min（為了排除溶解于培養(yǎng)基中的氧，切勿搖動），迅速冷卻。每15ml培養(yǎng)基中接種1g~2g固體食品或1ml~2ml液體食品（緩慢地將接種物接入肉湯液面下）。將樣品接種2管庖肉培養(yǎng)基（35±1℃下培養(yǎng)）和2管TPGY培養(yǎng)基（28±1℃下培養(yǎng)），均厭氧培養(yǎng)5天。觀察培養(yǎng)物的濁度、產(chǎn)氣、肉粒的消化和產(chǎn)生的氣味。若有生長繼續(xù)以下操作，若無生長，則繼續(xù)培養(yǎng)10天。 2、培養(yǎng)物分離取2ml培養(yǎng)液置于無菌試管中，加入等量無菌無水乙醇，混勻，放置1h。用接種環(huán)取2環(huán)經(jīng)處理過的培養(yǎng)物接種到厭氧卵黃瓊脂上，35±1℃下厭氧培養(yǎng)48h。挑取可疑菌落接種到TPGY培養(yǎng)基，35±1℃下厭氧培養(yǎng)24h。 3、DNA提取、擴(kuò)增　取1.4mlTPGY培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到離心管中，13000r/min離心2min，棄去上清液。沉淀加入500μl生理鹽水，震蕩重懸30s，13000r/min離心2min，棄去上清液。沉淀中直接加入50μlDNA提取液充分混勻，沸水浴10min，13000r/min離心3min，取上清液4μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增的DNA跑瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果用凝膠成像系統(tǒng)記錄。結(jié)果判定陰性對照和空白對照均未出現(xiàn)條帶，陽性對照出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶，待測樣品出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶則判定為PCR結(jié)果陽性，科標(biāo)生物檢測中心報告“檢出某型（A,B,E,F）肉毒梭菌”。待測樣品未出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶則判定為PCR結(jié)果為陰性，科標(biāo)生物檢測中心報告“未檢出某型（A,B,E,F）肉毒梭菌”。　　檢測咨詢熱線：0532-58979362 24小時應(yīng)急熱線：18906422741 聯(lián)系人：李工　　QQ：2482063104 企業(yè)郵箱：ssbta@sscta.cn 中心網(wǎng)站：http://www.ssbta.cn

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