方案優(yōu)勢

六種化合物的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9991～0.9998，實現(xiàn)了20min內(nèi)對六種化合物的同時測定。

采用標(biāo)準(zhǔn)

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

方法/原理/步驟

　　樣品處理

　　稱取2～3g粉碎均勻的樣品，加水15mL，超聲振蕩5min，取出后加入2mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入2mL乙酸鋅溶液，搖勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值約為7，用水定容到25～50mL，4 000r/min離心5min，取上清液經(jīng)0.45μm水系濾膜過濾，供高效液相色譜測定。若樣品中含有較多的脂肪時，可將定容好的樣液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入正己烷10ml,振搖1min,靜置分層，棄去正己烷層，再加入10mL正己烷重復(fù)提取一次，取下層水相置于離心管中，4 000r/min離心5min，取上清液經(jīng)0.45μm水系濾膜過濾，供高效液相色譜測定。

　　高效液相色譜檢測條件的確定

　　試驗方法

　　1.檢測波長的選擇

　　經(jīng)紫外光譜掃描190～400nm波段，得出六種物質(zhì)的最大吸收波長分別為：乙酰磺胺酸鉀(安賽蜜)226nm，糖精鈉202nm，阿斯巴甜208nm，苯甲酸226nm，山梨酸257nm，脫氫乙酸230nm、293nm。故選擇205nm作為這六種食品添加劑同時測定的波長，在波長205nm下各物質(zhì)靈敏度相近，基質(zhì)干擾少，樣品前處理相對簡單，可簡化日常工作，縮短檢測時間，提高檢測效率。

　　2.流動相及流動相比例的選擇

　　查閱文獻(xiàn)及現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)，在測定防腐劑和甜味劑時采用的流動相多是甲醇和乙酸銨。試驗發(fā)現(xiàn)單獨選用甲醇與乙酸銨或乙腈與乙酸銨時，六種化合物中的糖精鈉與阿斯巴甜都不能得到良好分離。試驗采用甲醇：乙腈：0.01mol/L乙酸銨做流動相，發(fā)現(xiàn)三種試劑的不同比例對分離度、峰形、靈敏度影響較大。有機相含量低時，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)出峰時間長；有機相含量高時，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)出峰時間縮短。選用0.01mol/L乙酸銨與甲醇、乙腈比例為(95:1:4)、(94:2:4)、(93:3:4)的流動相進(jìn)行等度試驗，結(jié)果表明，當(dāng)0.01mol/L乙酸銨與甲醇、乙腈的比例為93：3：4時，各待測物質(zhì)都能得到較好的分離，分析時間適中。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

　　1.苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜混合標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制

　　分別吸取苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)儲備液(濃度為1.0mg/mL，由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心購買)0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL于10mL容量瓶中，加水至刻度，即得含苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液系列。用0.45μm水相微孔濾膜過濾，待測。

　　2.高效液相色譜條件

　　色譜柱：Agilent C18液相色譜柱；流動相：乙腈：甲醇：0.01mol/L乙酸銨為4：3：93；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μL；檢測器：紫外檢測器，波長205nm。按以上色譜條件將六種物質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液進(jìn)行色譜分析，以保留時間定性，峰面積外標(biāo)法定量。

儀器設(shè)備

??? 儀器儀表

　　Agilent 1200液相色譜儀，紫外檢測器(VWD),自動進(jìn)樣器(G1313A)，Agile ntC18液相色譜柱，超聲波水浴振蕩器，離心機，分析天平(感量0.0001g)。